兩鐘蛋白質(zhì)測(cè)定方法比較
兩鐘蛋白質(zhì)測(cè)定方法比較
植物組織總蛋白質(zhì)的提取方法較多,常用的方法有TCA-acetone(三氯醋酸-丙酮沉淀)法,Tris法、磷酸緩沖液(PB)法和試劑盒法等,。另外,蛋白質(zhì)濃度的測(cè)定方法有紫外分光光度法(UV法),、Bradford法、定氮儀法,、雙縮脲(Biuret)法,、BCA(Bicinchoninic Acid)法、Lowry法和試劑盒法等,。其中現(xiàn)在最常用的還數(shù)蛋白質(zhì)測(cè)定儀,，因?yàn)榈鞍踪|(zhì)測(cè)定儀采用凱氏定氮法，而凱氏定氮法是標(biāo)準(zhǔn)的測(cè)定蛋白質(zhì)含量的方法,。下面我們就PB法和Tris法做一比較,。
采用PB法提取總蛋白,成本低,速度快,操作簡(jiǎn)單,提取量較高。但是,該法提取的總蛋白質(zhì)質(zhì)量差,損失了小分子量蛋白;而且,雜質(zhì)含量高,電泳時(shí)雜質(zhì)向泳道兩側(cè)擴(kuò)散,擠壓其他泳道,樣品放置一段時(shí)間后有明顯的雜質(zhì)沉淀,。因此,該法提取的總蛋白不宜用于電泳分析,。
Tris法是比較常用的方法,成本低,速度快,操作簡(jiǎn)單,提取量高。雖然采用該法提取的蛋白質(zhì)組分是完全的,但小分子量蛋白的量不如大分子量蛋白的,。經(jīng)過改進(jìn)后,雖有所改善,但仍不理想,。不過,采用改進(jìn)Tris法提取總蛋白,進(jìn)行SDS-PAGE電泳分析,效果良好。Tris堿雖可防止蛋白的水解,但由于引入鹽離子,會(huì)導(dǎo)致IEF(等電點(diǎn)聚焦)電壓過低,從而影響聚焦,。因此,用該法提取的總蛋白不宜用于二維電泳(2-DE)分析,。
